L-osteoartrite (OA) hija waħda mill-mard deġenerattiv kroniku fit-tul tal-għadam u l-ġogi li taffettwa l-popolazzjoni anzjana 'l fuq minn 65 sena.
1]. Ġeneralment, pazjenti bl-OA jiġu djanjostikati b'qarquċa bil-ħsara, sinovju infjammat, u kondroċiti mnaqqra, li jikkawżaw uġigħ u tbatija fiżika [
2]. L-uġigħ artritiku huwa kkawżat l-aktar mid-deġenerazzjoni tal-qarquċa fil-ġogi permezz ta' infjammazzjoni, u meta l-qarquċa tkun bil-ħsara serja, l-għadam jista' jaħbat ma' xulxin u jikkawża uġigħ insopportabbli u tbatija fiżika [
3]. L-involviment ta' medjaturi infjammatorji b'sintomi bħal uġigħ, nefħa, u ebusija tal-ġog huwa dokumentat sew. F'pazjenti bl-OA, ċitokini infjammatorji, li jikkawżaw l-erożjoni tal-qarquċa u l-għadam subkondrali jinstabu fil-fluwidu sinovjali [
4]. Żewġ ilmenti ewlenin li ġeneralment ikollhom il-pazjenti bl-OA huma l-uġigħ u l-infjammazzjoni sinovjali. Għalhekk l-għanijiet primarji tat-terapiji attwali tal-OA huma li jnaqqsu l-uġigħ u l-infjammazzjoni. [
5]. Għalkemm it-trattamenti disponibbli għall-OA, inklużi drogi mhux sterojdi u sterojdi, ippruvaw li huma effettivi biex itaffu l-uġigħ u l-infjammazzjoni, l-użu fit-tul ta’ dawn il-mediċini għandu konsegwenzi severi fuq is-saħħa bħal disfunzjonijiet kardjovaskulari, gastro-intestinali u renali [
6]. Għalhekk, trid tiġi żviluppata mediċina aktar effettiva b'inqas effetti sekondarji għall-kura tal-osteoartrite.
Prodotti tas-saħħa naturali qed isiru dejjem aktar popolari għax huma sikuri u faċilment disponibbli.
7]. Il-mediċini tradizzjonali Koreani wrew li huma effettivi kontra diversi mard infjammatorju, inkluża l-artrite [
8]. Aucklandia lappa DC. hija magħrufa għall-proprjetajiet mediċinali tagħha, bħat-titjib taċ-ċirkolazzjoni tal-qi biex ittaffi l-uġigħ u ttaffi l-istonku, u ilha tintuża tradizzjonalment bħala analġeżiku naturali [
9]. Rapporti preċedenti jissuġġerixxu li A. lappa għandha proprjetajiet anti-infjammatorji [
10,
11], analġeżiku [
12], kontra l-kanċer [
13], u gastroprotettiv [
14] effetti. L-attivitajiet bijoloġiċi varji ta' A. lappa huma kkawżati mill-komposti attivi ewlenin tagħha: costunolide, dehydrocostus lactone, dihydrocostunolide, costuslactone, α-costol, saussurea lactone u costuslactone [
15]. Studji preċedenti jsostnu li l-costunolide wera proprjetajiet anti-infjammatorji fil-lipopolysaccharide (LPS), li induċew il-makrofaġi permezz tar-regolazzjoni tal-mogħdija tal-proteina tax-xokk tas-sħana NF-kB [
16,
17]. Madankollu, l-ebda studju ma investiga l-attivitajiet potenzjali ta' A. lappa għat-trattament tal-OA. Ir-riċerka preżenti investigat l-effetti terapewtiċi ta' A. lappa kontra l-OA bl-użu ta' (monosodium-iodoacetate) MIA u mudelli ta' ġrieden indotti minn aċidu aċetiku.
Il-monosodium-iodoacetate (MIA) huwa magħruf li jintuża biex jipproduċi ħafna mill-imġieba ta' uġigħ u l-karatteristiċi patofiżjoloġiċi tal-OA fl-annimali [
18,
19,
20]. Meta tiġi injettata fil-ġogi tal-irkoppa, l-MIA tfixkel il-metaboliżmu tal-kondroċiti u tinduċi infjammazzjoni u sintomi infjammatorji, bħal erożjoni tal-qarquċa u tal-għadam subkondrali, is-sintomi kardinali tal-OA [
18]. Ir-rispons ta' tgħawwiġ ikkaġunat bl-aċidu aċetiku huwa meqjus b'mod wiesa' bħala s-simulazzjoni ta' uġigħ periferali fl-annimali fejn l-uġigħ infjammatorju jista' jitkejjel b'mod kwantitattiv [
19]. Il-linja taċ-ċelluli tal-makrofaġi tal-ġrieden, RAW264.7, tintuża b'mod popolari biex tistudja r-risponsi ċellulari għall-infjammazzjoni. Malli tiġi attivata bl-LPS, il-makrofaġi RAW264 jattivaw mogħdijiet infjammatorji u jnixxu diversi intermedjarji infjammatorji, bħal TNF-α, COX-2, IL-1β, iNOS, u IL-6 [
20]. Dan l-istudju evalwa l-effetti anti-noċiċettivi u anti-infjammatorji ta' A. lappa kontra l-OA f'mudell ta' annimal MIA, mudell ta' annimal indott minn aċidu aċetiku, u ċelluli RAW264.7 attivati minn LPS.
2. Materjali u Metodi
2.1. Materjal tal-Pjanti
L-għerq imnixxef ta' A. lappa DC. użat fl-esperiment inkiseb minn Epulip Pharmaceutical Co., Ltd., (Seoul, Korea). Ġie identifikat mill-Prof. Donghun Lee, Dipartiment tal-Farmakoloġija tal-Erbali, Kurunell tal-Mediċina Koreana, Università ta' Gachon, u n-numru tal-kampjun tal-vawċer ġie depożitat bħala 18060301.
2.2. Analiżi HPLC tal-Estratt ta' A. lappa
A. lappa ġie estratt bl-użu ta' apparat ta' rifluss (ilma distillat, 3 sigħat f'100 °C). Is-soluzzjoni estratta ġiet iffiltrata u kkondensata bl-użu ta' evaporatur bi pressjoni baxxa. L-estratt ta' A. lappa kellu rendiment ta' 44.69% wara tnixxif bil-friża taħt −80 °C. L-analiżi kromatografika ta' A. lappa twettqet b'HPLC imqabbad bl-użu ta' sistema HPLC 1260 InfinityⅡ (Agilent, Pal Alto, CA, USA). Għas-separazzjoni kromatika, intużat kolonna EclipseXDB C18 (4.6 × 250 mm, 5 µm, Agilent) f'35 °C. Total ta' 100 mg tal-kampjun ġie dilwit f'10 mL ta' 50% metanol u sonikatu għal 10 minuti. Il-kampjuni ġew iffiltrati b'filtru tas-siringa (Waters Corp., Milford, MA, USA) ta' 0.45 μm. Il-kompożizzjoni tal-fażi mobbli kienet 0.1% aċidu fosforiku (A) u aċetonitrile (B) u l-kolonna ġiet elużata kif ġej: 0–60 min, 0%; 60–65 min, 100%; 65–67 min, 100%; 67–72 min, 0% solvent B b'rata ta' fluss ta' 1.0 mL/min. L-effluwent ġie osservat f'210 nm bl-użu ta' volum ta' injezzjoni ta' 10 μL. L-analiżi twettqet fi tliet kopji.
2.3. Akkomodazzjoni u Ġestjoni tal-Annimali
Firien irġiel Sprague–Dawley (SD) ta’ 5 ġimgħat u ġrieden irġiel ICR ta’ 6 ġimgħat inxtraw minn Samtako Bio Korea (Gyeonggi-do, Korea). L-annimali nżammu f’kamra b’temperatura kostanti (22 ± 2 °C) u umdità (55 ± 10%) u ċiklu ta’ dawl/dlam ta’ 12/12-il siegħa. L-annimali kienu familjari mal-kundizzjoni għal aktar minn ġimgħa qabel ma beda l-esperiment. L-annimali kellhom provvista ad libitum ta’ għalf u ilma. Ir-regoli etiċi attwali għall-kura u l-immaniġġjar tal-annimali fl-Università ta’ Gachon (GIACUC-R2019003) ġew segwiti b’mod strett fil-proċeduri sperimentali kollha tal-annimali. L-istudju kien iddisinjat bħala prova parallela u bl-investigatur-blinded. Segwejna l-metodu tal-ewtanasja skont il-linji gwida tal-Kumitat tal-Etika Sperimentali fuq l-Annimali.
2.4. Injezzjoni u Trattament ta' MIA
Il-firien ġew separati b'mod każwali f'4 gruppi, jiġifieri finta, kontroll, indomethacin, u A. lappa. Wara li ġew anestetizzati b'taħlita ta' 2% isofluorane O2, il-firien ġew injettati bl-użu ta' 50 μL ta' MIA (40 mg/m; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) intra-artikularment fil-ġogi tal-irkoppa biex iwasslu għal OA sperimentali. It-trattamenti twettqu kif ġej: il-gruppi ta' kontroll u finta nżammu biss bid-dieta bażika AIN-93G. Il-grupp tal-indomethacin biss ingħata indomethacin (3 mg/kg) inkorporat fid-dieta AIN-93G u l-grupp ta' A. lappa 300 mg/kg ġie assenjat għal dieta AIN-93G supplimentata b'A. lappa (300 mg/kg). It-trattamenti tkomplew għal 24 jum mill-jum tal-induzzjoni tal-OA bir-rata ta' 15–17 g għal kull 190–210 g piż tal-ġisem fuq bażi ta' kuljum.
2.5. Kejl tal-Piż li Jġorr
Wara l-induzzjoni tal-OA, il-kejl tal-kapaċità tal-ġarr tal-piż tar-riġlejn ta' wara tal-firien sar bl-incapacitance-MeterTester600 (IITC Life Science, Woodland Hills, CA, USA) kif skedat. Id-distribuzzjoni tal-piż fuq ir-riġlejn ta' wara ġiet ikkalkulata: kapaċità tal-ġarr tal-piż (%)
